實驗原理：

Dot blot是一種半定量(liang)的蛋白質或核酸檢(jian)測(ce)方(fang)法，其原(yuan)理是將(jiang)待測(ce)物直接滴于固(gu)相載體上，然后(hou)通過(guo)特異性抗體或探針與(yu)待測(ce)物結合，最終(zhong)通過(guo)可視化(hua)方(fang)法來檢(jian)測(ce)目標分子的存(cun)在與(yu)否。

溶液配置：

操作步驟：

（1）減取適當大小的PVDF膜，于甲醇活化1分鐘；

（2）將活化后的PVDF膜于ddH2O中，在脫色搖床上清洗15分鐘；

（3）提取(qu)預(yu)冷離心機，將樣品(pin)在4℃低溫條件下8000 rpm離心15分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清作為樣品(pin)（分(fen)泌型(xing)蛋白(bai)）。

（4）取(qu)出(chu)活化(hua)后的(de)PVDF膜在室(shi)(shi)溫(wen)晾至半干(gan)，看見水膜消(xiao)失即可。將收(shou)集的(de)上清、空白對照、陽性(xing)對照分(fen)別取(qu)5ul點樣(yang)至PVDF膜上，風(feng)干(gan)。室(shi)(shi)溫(wen)待樣(yang)品(pin)吸收(shou)，樣(yang)品(pin)吸收(shou)后點樣(yang)處顏色加(jia)深。

（5）封(feng)閉(bi)：待PVDF膜上(shang)樣品干燥后(hou)，于含5%脫脂奶粉的TBST溶液中封(feng)閉(bi)，37℃培(pei)養箱(xiang)孵(fu)育2h或(huo)者4℃過(guo)夜孵(fu)育。

（6）TBST清洗PVDF膜(mo)5次，每(mei)次5分(fen)鐘。

（7）一(yi)抗孵(fu)育(yu)：用含5%脫(tuo)脂奶(nai)粉(fen)的TBST溶液(ye)以1：10000的稀釋(shi)比(bi)稀釋(shi)一(yi)抗，37℃培養箱孵(fu)育(yu)2h或4℃過夜孵(fu)育(yu)。

（8）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（9）二抗孵育(yu)：用含5%脫脂奶粉的TBST溶液以1：10000的稀(xi)釋比稀(xi)釋二抗，37℃培養箱孵育(yu)1.5 h。

（10）TBST清(qing)洗PVDF膜5次，每(mei)次5分鐘(zhong)。

（11）曝光：用濾(lv)紙(zhi)吸干(gan)PVDF膜上的TBST溶液，滴加ECL超敏顯(xian)色(se)劑（A液：B液=1：1），提前將化學曝光儀(yi)預冷，進行曝光，觀(guan)察并(bing)記錄結果。

以上就是本期的內容，更多(duo)資訊，。

安培(pei)生物致(zhi)力(li)成為推(tui)動生命(ming)科(ke)學(xue)進步值得信賴的(de)合作者(zhe)

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