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    CHO-K1倉鼠卵巢細胞株的培養方法

    發布時間: 2023-04-10  點擊次數: 111次

    中國(guo)倉(cang)鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)細(xi)胞是第一個被美(mei)國(guo)FDA、歐盟EMA和中國(guo)CFDA認可的(de)用于生物(wu)制藥領域的(de)生產(chan)細胞,已廣泛應用于各種治(zhi)療(liao)性蛋白質(zhi)藥物(wu)的(de)大規模制備,包括重(zhong)(zhong)組抗體、重(zhong)(zhong)組單體蛋白質(zhi)以及(ji)重(zhong)(zhong)組融合蛋白質(zhi)等。CHO-K1是未(wei)經改造的(de)野生型CHO細胞。最原始的CHO-K1細(xi)胞(bao)(bao)是貼壁培養,并需(xu)要添加血(xue)(xue)清,由于血(xue)(xue)清的批(pi)間(jian)穩(wen)定(ding)性問題,及(ji)后來(lai)病毒安全(quan)性問題,無血(xue)(xue)清懸浮培養成為(wei)趨勢。實(shi)驗室常以(yi)貼壁的CHO K1細(xi)胞(bao)(bao)構建穩(wen)轉細(xi)胞(bao)(bao)株。

     

                                    圖片


    細(xi)胞形(xing)態:長梭(suo)形(xing)(10×倍鏡)
    培養條(tiao)件:DMEM/F12培養基,胎(tai)牛血清終濃度為10%
    培養(yang)溫度:37°C

    細胞復(fu)蘇:


    1.在攝(she)氏37度的水浴中輕(qing)輕(qing)攪動,為防止受到污染(ran),不(bu)要把(ba)O形環和蓋(gai)子放在外面。解凍應迅速(約2分鐘)。
    2.解(jie)凍(dong)后把凍(dong)存管盡快(kuai)從水中拿出來,用75% 乙(yi)醇(chun)浸(jin)泡(pao)或噴灑消毒乙(yi)醇(chun)。從現在開始所有的(de)操作都應該進行在嚴格(ge)的(de)無(wu)菌條件下進行。
    3.將細(xi)胞懸液轉移到含(han)有9 ml

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