in vivo Advanced活體動物體內轉染試劑
描述
in vivo Advanced活體動物體內轉染試劑可(ke)以(yi)通過靜脈(mo)注射(she)(she)或(huo)體(ti)(ti)內局部組織注射(she)(she)的(de)方(fang)式完(wan)成(cheng)轉染(ran)過程(cheng)(cheng)。此(ci)外，轉染(ran)過程(cheng)(cheng)中總注射(she)(she)體(ti)(ti)積較(jiao)小，致密(mi)組織可(ke)通過顯(xian)微注射(she)(she)來完(wan)成(cheng)轉染(ran)，且轉染(ran)復(fu)合(he)物在體(ti)(ti)內循環(huan)時間較(jiao)長。DNA，siRNA及共(gong)轉染(ran)均可(ke)用此(ci)款(kuan)轉染(ran)試劑來完(wan)成(cheng)轉染(ran)操作。
基本條件
DNA
濃度: 300 ng/ul - 2 μg/ul;
溶劑: 質粒DNA需(xu)溶于雙蒸(zheng)水或超(chao)純水;
內(nei)毒(du)(du)素: 去(qu)內(nei)毒(du)(du)素
RNA
濃度: 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM
活(huo)體(ti)動(dong)物體(ti)內轉染操(cao)作(zuo)步驟(zou)
轉染復合(he)物制(zhi)(zhi)備: 核酸和轉染試劑(ji)直(zhi)接按照1:1混(hun)合(he)。之后用(yong)移液器吹打混(hun)合(he)溶液10-15次以(yi)充分混(hun)勻(yun)。將混(hun)合(he)溶液于室溫環境中靜置(zhi)10-15分鐘，轉染復合(he)物即可制(zhi)(zhi)備結束。在復合(he)物制(zhi)(zhi)備過程中，離(li)心管的管壁要確保沒有(you)液體(ti)殘留。
用注(zhu)射器或顯微注(zhu)射針完(wan)成靜(jing)脈注(zhu)射或局部組織注(zhu)射操(cao)作。
注(zhu)射(she)后3-5天，轉染效率可達(da)(da)到峰(feng)值，靶基因的表達(da)(da)量可于此時(shi)進行(xing)檢測。
活(huo)體動物(wu)體內轉染注射(she)用(yong)量(liang)
動物 | 注射方式 | 最大注射量(ul) | DNA用量(ug) | siRNA用量(ul) | 轉染試劑用量(liang)(ul) |
新生小鼠 | 腦室內注射 | 2 | 1 | 1 | 1 |
裸鼠 | 尾靜脈注射 | 400 | 62 | 62 | 62 |
腫瘤內注射 | 50 | 17 | 17 | 17 | |
成年小鼠 | 尾靜脈注射 | 400 | 62 | 62 | 62 |
腹腔內注射 | 800 | 100 | 100 | 100 | |
腦室內注射 | 5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | |
腫瘤內注射 | 50 | 17 | 17 | 17 | |
成年大鼠 | 尾靜脈注射 | 2000 | 505 | 505 | 505 |
腦室內注射 | 25 | 15 | 15 | 15 |
注意事項
DNA (μg) 或20 μM siRNA (μl)與(yu)轉染試劑的比例為1:1。
上表中siRNA的注射(she)體(ti)(ti)(ti)積是針對(dui)20 μM siRNA的。如果(guo)(guo)siRNA的濃(nong)度(du)為40 μM，則注射(she)體(ti)(ti)(ti)積需(xu)減半(ban)；如果(guo)(guo)siRNA的濃(nong)度(du)為80 μM，則注射(she)體(ti)(ti)(ti)積需(xu)為表中體(ti)(ti)(ti)積的1/4；以(yi)此(ci)類推。
進(jin)行局部組織注射實驗(yan)時(shi)，轉染(ran)復合物的用量為5-10 μl/cm2。
進(jin)行共轉染實(shi)驗(yan)時，核(he)酸總用(yong)量(liang)應和(he)上表中用(yong)量(liang)一致，各種核(he)酸用(yong)量(liang)的比例應根據實(shi)驗(yan)目的進(jin)行調整。之(zhi)后(hou)將各種核(he)酸與(yu)轉染試劑進(jin)行充分(fen)混合。
在具體實(shi)驗操作過程中(zhong)，核酸和轉染試劑的用量可根(gen)據上表中(zhong)最大注(zhu)射(she)用量進行適當調整(zheng)。
訂貨信息
品名 | 貨號 | 規格 |
in vivo Advanced Transfection Reagent | AV500025 | 0.25 ml |
in vivo Advanced Transfection Reagent | AV500050 | 0.50 ml |
in vivo Advanced Transfection Reagent | AV500075 | 0.75 ml |
in vivo Advanced Transfection Reagent | AV500150 | 1.50 ml |
in vivo Advanced Transfection Reagent | AV500500 | 5.00 ml |
in vivo Advanced Transfection Reagent | AV501000 | 10.00 ml |
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