細胞(bao)(bao)(bao)計(ji)數在細胞(bao)(bao)(bao)實驗中是非常(chang)常(chang)見的，大多數實驗室目前使(shi)用(yong)細胞(bao)(bao)(bao)計(ji)數板進行細胞(bao)(bao)(bao)計(ji)數，細胞(bao)(bao)(bao)計(ji)數板的結構如(ru)下圖所示：

實驗步驟

1.所用細胞密度達到一定要求后進行細胞計數鋪板，提前準備好細胞計數板、蓋玻片、計數器；

2.棄掉原有培養基，加(jia)入(ru)1ml溫浴的PBS緩沖液清(qing)洗；

3.棄掉PBS緩沖(chong)液(ye)，加入(ru)胰酶消化(hua)細胞，消化(hua)時間根據細胞類型及日常經驗決定(ding)；

4.消化相應(ying)時間后(hou)，加入(ru)二倍體積的培養基終止消化，用移液器將細胞全部(bu)吹下，轉(zhuan)移至(zhi)離心管內(nei)；

5.離(li)心(xin)機室溫800rpm,離(li)心(xin)5min；

6.準備(bei)和(he)所計數細胞種類相同的1.5ml Ep管，各加(jia)入PBS緩沖液(ye)980ul備(bei)用(yong)；

7.準備細胞(bao)計數板(ban)，并在計數區蓋上(shang)蓋玻片；

8.將5中離心結束的(de)細胞棄(qi)上清，加入(ru)1ml培(pei)養(yang)基(ji)，充分混懸后取20ul加入(ru)到6中的(de)Ep管中，充分顛倒混勻(yun)后取12ul加入(ru)牛鮑計(ji)數(shu)板一側的(de)計(ji)數(shu)區(qu)內，保證計(ji)數(shu)區(qu)充盈。

9.低倍(bei)顯微鏡(jing)（物鏡(jing)4）下找到計數視(shi)野，上圖中“"B C D E“"區(qu)為細胞(bao)計數區(qu)。

10.高倍鏡(jing)（物(wu)鏡(jing)10）下計(ji)數細(xi)(xi)胞，依(yi)次計(ji)數4個方格內的細(xi)(xi)胞數量。

11.計算(suan)細胞數量，假設4個(ge)方格內細胞總數為A,則每ml的細胞數量為：A/4×104×50（稀釋倍數）=B個(ge)。

12.假設鋪板所(suo)需(xu)細胞密度為1×104個(ge)/ml，則所(suo)需(xu)8中(zhong)的(de)細胞混懸液(ye)的(de)量為：1×104×C（培(pei)養(yang)基(ji)所(suo)需(xu)毫升數，如6孔板每孔加(jia)培(pei)養(yang)基(ji)2ml）/B=D ml，最后(hou)換(huan)算成(cheng)μl即可(ke)。

13.鋪板(ban)：取C ml培(pei)養基，加(jia)入(ru)8中細胞混懸(xuan)液D μl，充分混勻后依次(ci)加(jia)入(ru)培(pei)養皿中，放入(ru)細胞培(pei)養箱內(nei)即可(ke)。

4.細胞(bao)混懸液(ye)(ye)加(jia)入細胞(bao)計數(shu)板時，建議使用10μl小槍頭、2-20μl移液(ye)(ye)器，槍頭傾斜抵住蓋玻(bo)片邊緣(yuan)，緩慢加(jia)入，務必保證細胞(bao)混懸液(ye)(ye)全部加(jia)入，計數(shu)區充盈。

關于細胞(bao)計(ji)數，以如下(xia)實(shi)例來充分理(li)解(jie)上述計(ji)算過程：

4.鋪板：培養基5孔(kong)（為(wei)防止(zhi)不夠所以(yi)多準備1孔(kong)）2ml×5孔(kong)=10ml加入(ru)細胞混懸(xuan)液(ye)800μl，混勻加入(ru)六孔(kong)板即可。

以上(shang)就是(shi)本期的(de)內(nei)容，更多資訊，。

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