一、背景介紹

克(ke)隆(long)(long)形(xing)成實(shi)驗(yan)是研究細(xi)胞存活率并(bing)探討單個(ge)(ge)細(xi)胞增(zeng)殖潛能的(de)有效方(fang)法之(zhi)一。即在(zai)體外培養環境(jing)下，通過(guo)使單個(ge)(ge)細(xi)胞經過(guo)連續分裂增(zeng)殖至(zhi)少6代，形(xing)成的(de)細(xi)胞集群被(bei)稱為克(ke)隆(long)(long)或集落。每個(ge)(ge)克(ke)隆(long)(long)的(de)尺寸通常在(zai)0.3-1.0mm之(zhi)間(jian)，含有50個(ge)(ge)以上的(de)細(xi)胞。通過(guo)計算克(ke)隆(long)(long)形(xing)成率，能夠對單個(ge)(ge)細(xi)胞的(de)增(zeng)殖潛力(li)進行量(liang)化分析。

用途：

（1）評估細(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)殖(zhi)能(neng)力(li)：克隆形成實驗可(ke)(ke)以幫助研究人(ren)員評估細(xi)胞(bao)(bao)的增(zeng)殖(zhi)潛(qian)力(li)。通過觀察(cha)和計數形成的獨立克隆，可(ke)(ke)以了解細(xi)胞(bao)(bao)在(zai)體(ti)外環境中的增(zeng)殖(zhi)速率和能(neng)力(li)。

(2)研究細(xi)胞群體依賴(lai)性：克(ke)隆形成實驗有(you)助于了(le)解細(xi)胞的(de)群體依賴(lai)性，即(ji)細(xi)胞是否需要相互(hu)合作形成克(ke)隆。這對于理解細(xi)胞群體內的(de)相互(hu)作用和(he)細(xi)胞信號傳導(dao)至關重要。

(3)篩(shai)選藥(yao)物(wu)和治療方(fang)案(an)：克隆(long)形(xing)成(cheng)實驗可(ke)用(yong)于(yu)評估藥(yao)物(wu)對細胞增殖的影響。通(tong)過(guo)在(zai)實驗前后(hou)比較(jiao)克隆(long)形(xing)成(cheng)率，研究人(ren)員可(ke)以評估潛在(zai)藥(yao)物(wu)或治療方(fang)案(an)的療效。

常用的手段有兩個：

①平板(ban)克隆形成實(shi)驗：通過將細胞培養于(yu)培養基(ji)中，主(zhu)要適用于(yu)貼壁生長的細胞，以(yi)評估(gu)細胞的克隆形成能力。

②軟瓊脂(zhi)克隆形成實驗(yan)：通過將細(xi)胞(bao)懸浮于含瓊脂(zhi)糖(tang)的培(pei)養基中，主要用于評(ping)估貼壁和懸浮的腫瘤細(xi)胞(bao)或轉(zhuan)化細(xi)胞(bao)系的克隆形成潛能(neng)。

二(er)、平板(ban)克隆形成實驗的實驗步驟(zou)

(1) 從細胞處于對數(shu)生長期狀(zhuang)態開始，通過胰酶消化將細胞懸(xuan)浮于(yu)血清培養基中(zhong)，并進行準確計數；

(2) 在(zai)每個(ge)實驗組(zu)中，控(kong)制細胞數(shu)量(liang)(liang)在(zai)400-1,000個(ge)細胞/孔(kong)的范(fan)圍內（對(dui)于不(bu)同的細胞類型，需要進行(xing)預實驗以(yi)確(que)定最(zui)佳細胞數(shu)量(liang)(liang)），并接種于6孔(kong)板(ban)；

(3) 持續培(pei)養(yang)至14天，或直到大多數(shu)單(dan)個(ge)克隆中的細(xi)胞(bao)數(shu)超過(guo)50個(ge)。在培(pei)養(yang)過(guo)程中，每隔3天更(geng)換培(pei)養(yang)基，并(bing)觀察細(xi)胞(bao)狀態；

(4) 克隆形成完成后，使(shi)用1 mL 4%多聚甲醛(quan)進行細胞固(gu)定(ding)，固(gu)定(ding)時間為(wei)15-30分鐘(zhong)。最后，用PBS洗滌；

(5) 向每(mei)個孔中加入1 mL結晶紫染(ran)液，染(ran)色時間控制在10-20分鐘內；

(6) 利用PBS進行多次細胞洗(xi)滌，進行拍照(zhao)（分別對整個(ge)六孔板及每個(ge)孔進行單(dan)獨(du)拍照(zhao)）。

注意：本(ben)實(shi)驗的成功關鍵(jian)在(zai)于細胞(bao)(bao)(bao)懸(xuan)液的制備和適度(du)的接(jie)種(zhong)密(mi)(mi)度(du)，務必確(que)保細胞(bao)(bao)(bao)均勻分散，防止(zhi)細胞(bao)(bao)(bao)團的形成，并謹慎(shen)確(que)保接(jie)種(zhong)密(mi)(mi)度(du)不過于密(mi)(mi)集。

以上就是本期的內容(rong)，更多資訊，。

安培(pei)生(sheng)物致力成為推動生(sheng)命科(ke)學進步值(zhi)得信賴(lai)的合作者(zhe)

深(shen)圳/湛江(jiang)安(an)培生(sheng)(sheng)物科(ke)技(ji)有(you)限公(gong)司,是一家具有(you)核心的(de)(de)技(ji)術(shu)實力(li)、先進(jin)的(de)(de)經營管理水平和(he)完善的(de)(de)市場銷(xiao)售(shou)體(ti)系的(de)(de)生(sheng)(sheng)物高科(ke)技(ji)企業。總部設在(zai)廣東，服務(wu)面向全(quan)國。安(an)培生(sheng)(sheng)物集進(jin)口試劑、實驗室耗材銷(xiao)售(shou)、技(ji)術(shu)服務(wu)與合約(yue)開發為(wei)一體(ti)的(de)(de)專業化高科(ke)技(ji)公(gong)司，旨在(zai)為(wei)生(sheng)(sheng)命科(ke)學(xue)(xue)(xue)的(de)(de)發展提(ti)供(gong)(gong)較好(hao)的(de)(de)產品(pin)與服務(wu)。本(ben)公(gong)司建立(li)了(le)涵蓋分(fen)子生(sheng)(sheng)物學(xue)(xue)(xue)、細(xi)胞生(sheng)(sheng)物學(xue)(xue)(xue)、免疫學(xue)(xue)(xue)、信號傳(chuan)導和(he)神經科(ke)學(xue)(xue)(xue)等領域(yu)的(de)(de)產品(pin)供(gong)(gong)應線，在(zai)各(ge)個(ge)領域(yu)內(nei)向用戶提(ti)供(gong)(gong)較高的(de)(de)水平和(he)質(zhi)量穩定(ding)的(de)(de)產品(pin)，安(an)培生(sheng)(sheng)物致力(li)于為(wei)廣大的(de)(de)科(ke)研(yan)機構、高等院校等客戶提(ti)供(gong)(gong)各(ge)種產品(pin)、技(ji)術(shu)支持與服務(wu)。

可以在(zai)第一時(shi)間為用戶提供比較先進的專業資訊(xun)和完備的產品和物流(liu)服務。 專(zhuan)(zhuan)業的(de)(de)技術(shu)力量使(shi)得我們能(neng)夠為(wei)廣(guang)大(da)用(yong)戶提供(gong)強大(da)的(de)(de)技術(shu)支持，深厚的(de)(de)人(ren)脈資源使(shi)得我們在全國主要城市擁有(you)眾多的(de)(de)合作伙伴，安(an)培生(sheng)物非常榮幸能(neng)將世界上先進的(de)(de)高(gao)科技產(chan)品(pin)推(tui)薦給國內(nei)從事生(sheng)物學領(ling)域科研的(de)(de)老師和(he)同(tong)仁。作為(wei)專(zhuan)(zhuan)業性的(de)(de)產(chan)品(pin)供(gong)應商，公司出資存備(bei)了大(da)量現貨，配(pei)合優秀的(de)(de)銷(xiao)售隊伍以及專(zhuan)(zhuan)業的(de)(de)技術(shu)支持，隨時(shi)為(wei)客戶提供(gong)服務。