小鼠皮下成瘤3D基質膠

應用：

•3D 細胞球體培(pei)養 

•小鼠皮下成(cheng)瘤(liu) 

•細胞侵襲(xi) 

•適合用于 3D 細胞藥物篩(shai)檢平臺 

•細胞生長和分化(hua) 

•代謝/毒理學(xue)研究

樣本類(lei)型(xing)： 

•腫瘤細(xi)胞系、哺(bu)乳動物組織

小鼠皮下成瘤3D基質膠試劑盒組分

小(xiao)鼠皮(pi)下成瘤實驗準備程序 

A、細胞房內材料準備(bei)、試劑制(zhi)備(bei)及步(bu)驟

(1) 材料(liao)準(zhun)備: 

1. 冰盒、

2. 37 ℃ 水(shui)浴槽、

3. C 緩沖溶液(10X)、

4. 無(wu)血清細胞培養(yang)液 (例如(ru): 無(wu)血清 DMEM，DMEM-F12等，不(bu)可用 PBS )、

5. A 膠(jiao) (2X)、

6. 細胞培養液、

7. 23-26G 針頭(tou)、

8. 1 mL 針筒、

9. 細胞。

(2) 試劑制備:

1、C 緩(huan)沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使(shi)用 37 ℃ 水浴回溫(wen)的無血清細胞培養液 (例(li)如: 無血清 DMEM 或 DMEM-F12 等，不可(ke)用 PBS ) 稀(xi)釋(shi) C 緩(huan)沖溶液 (10 X) 至 C 緩(huan)沖溶液 (0.5 X), 即體積(ji)稀(xi)釋(shi) 20 倍。使(shi)用 前放置 37 度水浴槽。(例(li)如:1 mL C 緩(huan)沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清 DMEM; 若(ruo)未使(shi)用完畢，可(ke)先保存于 4 ℃ 冰箱, 保存一周) 

2、A膠(jiao)(jiao) (1X) 制備 : 將(jiang) A膠(jiao)(jiao) (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于(yu)(yu)37 ℃ 水浴槽回(hui)溫10分鐘，確認*溶(rong)(rong)解(jie)。 再將(jiang) 37 ℃ 水浴回(hui)溫的(de)無血(xue)清細胞培(pei)養液取 0.5 mL，加至(zhi) 37 ℃ 已溶(rong)(rong)解(jie)的(de) 0.5 mLA膠(jiao)(jiao) (2X)，配置成(cheng) 1 mL 的(de) A膠(jiao)(jiao) (1X)。使用前(qian)置于(yu)(yu)37度，可降低黏度。 (單(dan)次(ci)使用，勿(wu)重復冷凍解(jie)凍 A膠(jiao)(jiao) (1X) )

(3)步驟:

1、取細胞(bao)(bao)溶(rong)液離心(xin)后收(shou)集細胞(bao)(bao)沉淀，與C緩沖(chong)溶(rong)液 (0.5 X) 均勻混合使細胞(bao)(bao)濃度(du)為3*106 cells/mL。

2、A膠(jiao)(jiao) (1X) 與步驟 1 含 C緩沖(chong)溶液 (0.5 X) 的(de)細胞(bao)系懸浮(fu)液，按(an)照 2:1 比例(li)均勻混(hun)合配(pei)置，細胞(bao)懸浮(fu) 液最終濃(nong)度為 106 cells/mL。使用前置于(yu)37℃，可降低黏度。 (C緩沖(chong)溶液用于(yu)A膠(jiao)(jiao)凝膠(jiao)(jiao)反應，例(li)如(ru)0.5ml C 緩沖(chong)溶液(0.5 X)含細胞(bao) 加入 1ml A膠(jiao)(jiao) (1X) 混(hun)合成1.5ml 的(de)注射液) 

3、選(xuan)用 23-26 G 的(de)針(zhen)頭(tou)(tou) (建(jian)(jian)議(yi)選(xuan)用 24 G) 及(ji) 1 mL 針(zhen)筒，抽取(qu) 步驟(zou)2 A膠(jiao)與 C緩(huan)沖(chong)溶液的(de)細胞(bao)混合(he)液 至所(suo)需注(zhu)射體積 (例(li)如:0.2-0.6 mL) 。室溫37℃至20℃操作(zuo)抽取(qu)。 (若(ruo)抽取(qu)時發生塞(sai)針(zhen)狀態，可先把(ba)針(zhen)頭(tou)(tou) 拔掉，以針(zhen)筒進(jin)行抽取(qu)，建(jian)(jian)議(yi)一次抽取(qu)配置好所(suo)需針(zhen)筒數量，避免(mian)步驟(zou)2 溶液過度凝膠(jiao)，發生塞(sai)針(zhen))

4、將抽取好步(bu)驟 3 的針筒，帶入動(dong)物房, 若短(duan)時間無法(fa)施打(da)建議置于冰上。

B、動物房內材料準(zhun)備及步(bu)驟 (1)材料準(zhun)備: 

1. 含 A膠與 C緩沖溶(rong)液(ye)的細(xi)胞混合液(ye)的針筒、

2. 皮膚消毒劑 (例如 : 酒精)、

3. 手套、

4. 實驗小鼠、

5. 麻醉(zui)小鼠的試劑

(2)步驟:

1、室(shi)溫(wen)下(xia)可直接注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)。若是置于冰盒(he)上(shang)(shang)的(de)針(zhen)筒(tong)(tong)，回到室(shi)溫(wen)后，待液化再進(jin)行注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)。 含 A膠與 C緩沖溶液 的(de)細胞混合液的(de)針(zhen)筒(tong)(tong)，以皮下(xia)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)方式(shi)，注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)實(shi)驗所需的(de)體積至實(shi)驗鼠 (建議皮下(xia)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)量為 0.2 mL，實(shi)際 狀況依需求而定(ding))。(針(zhen)筒(tong)(tong)放(fang)冰上(shang)(shang)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)阻力會(hui)上(shang)(shang)升, 放(fang)室(shi)溫(wen)會(hui)液化注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)阻力小。注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)時若因凝(ning)膠緣(yuan)故而阻力變 大(da)，需緩慢注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)避(bi)免針(zhen)頭噴落(luo))

注(zhu)1 : 注(zhu)射(she)(she)體積(ji)(ji)可依不同實驗目的做調整，若為皮下血管生成研究注(zhu)射(she)(she)體積(ji)(ji)需(xu)至少0.5 mL以(yi)上。

注2 : 此步驟(zou)依實驗需求可執行(xing)(xing)或不執行(xing)(xing)，若(ruo)需呈(cheng)現明顯的(de)皮下注射隆起效果，可調整2.試劑制(zhi)備將C緩沖(chong) 溶液(ye) (10 X) 稀釋(shi)15倍(bei)，變成C緩沖(chong)溶液(ye) (0.66 X)，再執行(xing)(xing)后續成膠實驗；提高(gao)(gao)C濃度(du)，可提高(gao)(gao)膠體硬度(du)。

2、培養一(yi)至三周后觀察量測(ce)接(jie)種的腫瘤(liu)尺寸。

注 3 : 若為(wei)血管生成研究，應注射(she)含 VEGF 及 heparin 的 A 膠，以(yi)促進血管生成。約(yue)三天后(hou)，可摘取含有 新(xin)血管生成的腫(zhong)瘤(liu)組織(zhi).

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