轉染是實驗過程中常用的技術操作，通俗來說，常見的轉染即為把某種功能性質粒轉到細胞中去，通過轉染試劑的作用在經過一段時間后，收集細胞通過WB、qpcr等來檢測質粒是否正常發揮作用來達到我們實驗的某種需求；不同的質粒通常有不同的轉染試劑和不同的方法，如PEI轉染、lipo2000轉染等。

Lipofectmine ™ RNAiMAX轉(zhuan)染(ran)主要供siRNA和Stealth ™ RNAi 雙鏈體轉(zhuan)染(ran)使(shi)用，具(ju)有轉(zhuan)染(ran)效率高、對細胞毒性小等優點，分為正(zheng)向(xiang)轉(zhuan)染(ran)及反(fan)向(xiang)轉(zhuan)染(ran)兩種方式。siRNA轉(zhuan)染(ran)比較常見，因此本文分享主要針對siRNA反(fan)向(xiang)轉(zhuan)染(ran)。

轉染前準備

1.準(zhun)備試劑包括：Opti-MEM培(pei)養基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA、不加雙抗的10%FBS培(pei)養基、胰(yi)酶、PBS緩沖液等常見(jian)處理細(xi)胞的試劑。

2.反向(xiang)轉染要(yao)求細胞(bao)密度≥90%。

轉染中

1.按正常(chang)處理細胞(bao)的流程(cheng)將長(chang)滿的細胞(bao)經過胰酶消化離心后去上清，注意(yi)此處需(xu)要加無雙抗的10%FBS培養基1ml進行(xing)細胞(bao)重懸，重懸完后根據(ju)細胞(bao)生長(chang)速(su)度(du)鋪細胞(bao)，保證轉(zhuan)染完后24h細胞(bao)密度(du)達到30-50%。

2.轉(zhuan)染復(fu)合物(wu)制備：根據說(shuo)明書(shu)制備轉(zhuan)染復(fu)合物(wu)，添加量如下表(biao)所(suo)示。

根據轉染(ran)的(de)實際(ji)情(qing)況將(jiang)Opti-MEM培養基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA依次加入到一個無菌Ep管(guan)中，按照先(xian)加Opti-MEM培養基、再加siRNA最后(hou)加Lipofectamine™ RNAiMAX試劑的(de)順序，輕輕混勻室溫孵育20min。

3.20min后依次將轉染復合物加入(ru)細(xi)胞(bao)培養皿種，輕輕混勻(yun)，放入(ru)細(xi)胞(bao)培養箱(xiang)內。

轉染后

1.轉染后24h內最好不要挪動細胞，也不要拿出在顯微鏡下觀察，期間也無需進行細胞換液。

2.轉(zhuan)染(ran)后48h后，可拿出細(xi)胞觀察細(xi)胞形(xing)態(tai)有無變圓，肉眼觀察轉(zhuan)染(ran)效率(lv)，對于生長較慢(man)的細(xi)胞，其表型可能會(hui)在72h內逐漸顯現。根據細(xi)胞生長情況可進行換液(ye)，注意此時(shi)需要換含雙(shuang)抗的血清培養基。

3.在顯微鏡下觀察細胞(bao)形態，若細胞(bao)變(bian)圓較(jiao)為厲(li)害，應在轉(zhuan)染后4天左右收細胞(bao)進行轉(zhuan)染效(xiao)率測定，時間太(tai)久細胞(bao)太(tai)少的話檢測難度較(jiao)大。

4.此種轉染方式(shi)最長(chang)可維持5-7天的基因敲除效果。

注意事項

1. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑在冰箱4℃保存，切記不能冷凍。

2. Lipofectamine™ RNAiMAX試(shi)劑(ji)不(bu)宜在室(shi)溫放置過久，因(yin)此在制備(bei)轉染復合物前從冰箱拿出，加完后應立即放回4℃再(zai)進行后續(xu)操作。

3.轉染(ran)復合物制(zhi)備完(wan)成后室溫孵育時間不(bu)得超過20min，因此建議將細胞(bao)鋪好板后十字混勻，暫放(fang)于細胞(bao)培養(yang)箱內，再進行(xing)轉染(ran)復合物的制(zhi)備。

4.siRNA應(ying)于-80℃保(bao)存。

5.在處理細胞(bao)重懸(xuan)時一定要使用無雙抗的10%FBS培養基(ji)，避免(mian)細胞(bao)死亡，如果(guo)在鋪板后還(huan)要進行細胞傳代(dai)也沒有影響，直接用上述混懸液傳代即可。

6. Lipofectamine ™ RNAiMAX轉(zhuan)染(ran)(ran)的兩種方式差別不(bu)是很大，主(zhu)要區別在于正向轉(zhuan)染(ran)(ran)需(xu)要提前一(yi)天(tian)進(jin)行細胞(bao)鋪(pu)板，第二天(tian)直(zhi)接加入(ru)轉(zhuan)染(ran)(ran)復(fu)合物，同時還需(xu)要在轉(zhuan)染(ran)(ran)后(hou)4-6h進(jin)行細胞(bao)換(huan)液。反向轉(zhuan)染(ran)(ran)速度比正向轉(zhuan)染(ran)(ran)更(geng)快(kuai)，操作較為簡潔(jie)，因此更(geng)建議(yi)使(shi)用(yong)反向轉(zhuan)染(ran)(ran)。

以上(shang)就是本期的內容，更多(duo)資訊，。

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