在做細胞基礎實驗時，必要的一步就是需要探究清楚細胞的增殖變化和毒性耐藥變化情況，為下一步實驗做準備。

我們在做CCK-8增(zeng)殖(zhi)和毒性實驗中常(chang)常(chang)會遇到(dao)一下幾個(ge)問題：

1.細(xi)胞鋪板問題 2.給CCK-8的方式問題 3.CCK-8的反應時間問題

首先(xian)，在進(jin)行細(xi)胞(bao)(bao)鋪(pu)板(ban)時， 需要用血球計數(shu)(shu)板(ban)進(jin)行細(xi)胞(bao)(bao)計數(shu)(shu)，得(de)到細(xi)胞(bao)(bao)數(shu)(shu)量后按(an)照(zhao)所需鋪(pu)板(ban)的細(xi)胞(bao)(bao)數(shu)(shu)量進(jin)行調整。一般96孔板(ban)鋪(pu)板(ban)數(shu)(shu)量為1*10^6/孔。

制備(bei)細胞懸液時需要反復吹(chui)打，使細胞懸液充分(fen)混(hun)勻，降低(di)出(chu)現(xian)細胞團塊的幾率(lv)。一般96孔(kong)(kong)板，每(mei)孔(kong)(kong)加(jia)入(ru)100微(wei)升細胞懸液，從孔(kong)(kong)的9點鐘方(fang)向打入(ru)，加(jia)入(ru)半張板子(zi)時，需要再次(ci)將細胞吹(chui)勻，然后繼續加(jia)剩余的孔(kong)(kong)。

待全部(bu)加入完畢時(shi)，蓋上蓋子，放入培(pei)養箱(xiang)。（細胞的均勻(yun)鋪被是本實驗成(cheng)功的大前提）。

其次，是(shi)(shi)細(xi)胞的處理。一般給CCK-8有兩種方(fang)式(shi)：第一種是(shi)(shi)直接每孔加(jia)入10微升的CCK8原液；另一種則(ze)是(shi)(shi)配(pei)置含10%的CCK-8培養基，以換液的形式(shi)加(jia)入孔板。

第一種方式的弊端在(zai)于10微升的CCK-8量比(bi)較少，可能因(yin)沾(zhan)在(zai)孔壁導致誤差的出現(xian)。

第二種(zhong)方式可(ke)以避免上述(shu)情況的發生(sheng)，但操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)仍需(xu)注意10%的CCK-8培養基需(xu)要現配現用(yong)；其次打(da)入(ru)100微升(sheng)的CCK-8時沿著(zhu)孔壁將(jiang)槍頭伸入(ru)液體緩緩打(da)出，再移出槍頭。

期間可能會產生小氣(qi)(qi)(qi)泡(pao)，需要用無菌針頭燒(shao)紅插(cha)入氣(qi)(qi)(qi)泡(pao)，消(xiao)除氣(qi)(qi)(qi)泡(pao)。（氣(qi)(qi)(qi)泡(pao)會影響OD值(zhi)，因(yin)此應該盡(jin)量消(xiao)除）。

最后，就是反應時間問題。將孔板放入培養箱培養1-4小時，引細胞種類和數量的差異，可能形成的Formazan的量不一樣。因此需要把握好培養的時間。

我的經驗是：在培養2h后，取出孔板，每孔抽取90微升加入至新孔板，進行第一次檢測，看看顯色的深淺程度（仍然需要注意氣泡，若有氣泡需要待氣泡消除后再進行檢測）

若顯色較淺，則可除去舊培養基，加入新培養基，再培養1-4小時，重新加CCK-8步驟，然后將其放入培養箱培養4小時，再進行檢測（其最佳反應時間為0.5、1、2小時）

以上就是(shi)本期(qi)的內容，更多資訊，。

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