1.把要做的切片先分好，做幾個抗體可分幾盒，不正(zheng)常組織(zhi)與正(zheng)常組織(zhi)要分開。其余做預實驗用(yong)。 

2.選擇實驗要(yao)做的(de)抗體時，要(yao)結合他們的(de)正常組織和(he)癌組織的(de)分別表達(da)率。

3.試(shi)劑盒的選擇(ze)可結合(he)生物素強弱的情況。如：肝組織生物素含(han)量(liang)高，S-P 試(shi)劑盒生物素含(han)量(liang)也(ye)高，故不能配合(he)使(shi)用。 

4.每次開始(shi)做時(shi)，都必(bi)須(xu)先(xian)清點(dian)實驗的(de)(de)必(bi)需品是否(fou)齊全。想好(hao)(hao)(hao)可能發生的(de)(de)意外，并先(xian)想好(hao)(hao)(hao)補救措(cuo)施。當抗體不夠用的(de)(de)情況(kuang)下(xia)，原先(xian)買的(de)(de)抗體最好(hao)(hao)(hao)不要用完(wan)，留做可能需要的(de)(de)驗證(zheng)試驗。新的(de)(de)抗體要盡量同(tong)公司，同(tong)批號。

5.烤(kao)片（單一(yi)或綜合）程(cheng)度(du)要(yao)適情(qing)況而定，可中途拿(na)出甩一(yi)甩，盡可能先(xian)放(fang)在烤(kao)箱里烤(kao) 3 小時以上。切勿把片烤(kao)得太久了。程(cheng)度(du)剛好，脫蠟(la)效果(guo)才(cai)會好。注意做好不(bu)同條件(jian)的切片標(biao)記。注意溫度(du)穩定，再烤(kao)片。 

6.二甲(jia)(jia)苯(ben)脫蠟(la)。溫度(du)(du)過低時，可先把二甲(jia)(jia)苯(ben)整罐放(fang)進(jin)烤箱加(jia)熱，或者可把片(pian)放(fang)在二甲(jia)(jia)苯(ben)里一起加(jia)熱脫蠟(la)，這樣效(xiao)果會(hui)(hui)更好；若溫度(du)(du)適(shi)宜(yi)，那還是在室溫下脫蠟(la)，要不可能會(hui)(hui)適(shi)得其反。時間也是適(shi)情(qing)況而定。

7.高(gao)壓修復(fu)時，要注意(yi)稀釋比例，修復(fu)液的種類（EDTA 不(bu)可(ke)(ke)以重新進行利(li)用(yong)，可(ke)(ke)能發生(sheng)交(jiao)叉作用(yong)），PH 值等。高(gao)壓鍋(guo)內(nei)壓力(li)未降至(zhi)正常(chang)時不(bu)可(ke)(ke)打開，壓力(li)正常(chang)后(hou)可(ke)(ke)多(duo)放(fang)會(hui)兒，能更(geng)好的利(li)用(yong)余壓，把(ba)握程度。若是多(duo)次修復(fu)，每次都需先把(ba)鍋(guo)內(nei)熱水倒掉，換冷水，保證條件(jian)的可(ke)(ke)重復(fu)性。 

8.抗(kang)(kang)體(ti)(ti)反復凍融可使效價降低。抗(kang)(kang)體(ti)(ti)要防止(zhi)污染。不可用塑料(liao)保存，塑料(liao)可吸附抗(kang)(kang)體(ti)(ti)。抗(kang)(kang)體(ti)(ti)稀(xi)釋：應遵循“現用現配"的(de)原則，對于 PBS（其他稀(xi)釋液，注意 PH 值(zhi)，PBS 為偏中堿性）稀(xi)釋的(de)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)最好要當天使用。稀(xi)釋比例恰好為佳(jia)，注意前(qian)帶和后帶效應。

9.吹干(gan)封(feng)片時不(bu)能有泡泡。若是沒封(feng)好(hao)，可(ke)進行二甲(jia)苯(ben)、酒(jiu)精(jing)脫(tuo)樹(shu)膠(jiao)，吹干(gan)再(zai)次封(feng)片，但(dan)鏡(jing)下效果會(hui)明(ming)顯變差。因而，若沒必(bi)要，最(zui)好(hao)不(bu)要再(zai)次脫(tuo)膠(jiao)。DAB 顯色需(xu)用(yong)中性樹(shu)膠(jiao)封(feng)片，AEC （易(yi)溶于(yu)有機溶劑）需(xu)用(yong)水性膠(jiao)封(feng)片。 

10.剛封完的(de)載(zai)玻片(pian)會移動，故切片(pian)還沒干時，盡(jin)量不(bu)要碰到蓋(gai)玻片(pian)，可避免樹膠溢出(chu)，片(pian)的(de)整體效果(guo)不(bu)好(hao)。

附錄：臨(lin)床上常用免疫組化指標 

通常(chang)惡性(xing)腫瘤(liu)，免疫組化耐(nai)藥(yao)預后標記(ji)（共 4 個(ge)(ge) marker）為：P-gp，GSTπ，TOPOII，Ki-67。而(er)乳腺癌(ai)免疫組化耐(nai)藥(yao)預后標記(ji)（共 7 個(ge)(ge) marker）為：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER， PR，C-erbB-2。