聚合酶鏈式反應

什么是聚合酶鏈式反應？

聚合(he)酶(mei)鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）是一項用于(yu)放大擴增特定的(de)DNA片(pian)段(duan)的(de)分子生物學技術，它是在DNA聚合(he)酶(mei)和核苷酸底物共同參與下(xia)，將(jiang)該段(duan)DNA擴增至足夠數量(liang)，以便進(jin)行結構和功能分析。

影響PCR實驗的因素之一 —— 耗材

在PCR實驗中，影響擴增(zeng)效果的(de)(de)因素(su)有很多。我(wo)們能想到的(de)(de)有dNTP的(de)(de)質量與(yu)濃度、模板核(he)酸的(de)(de)量與(yu)純化程度、引物的(de)(de)設計、DNA聚合酶的(de)(de)濃度、擴增(zeng)長度等問(wen)題。

實(shi)(shi)際上，使用的耗材(cai)也可能會影響實(shi)(shi)驗(yan)結果，而這往(wang)往(wang)被我們所忽略。因此在選擇實(shi)(shi)驗(yan)耗材(cai)前，我們還需要了解PCR耗材(cai)相(xiang)關(guan)的特性和術語(yu)。

如何選擇合適的PCR耗材

品牌(pai)：鋼士特GUNSTER(中國臺灣)

名稱：PCR八聯排管(guan)(管(guan)蓋分離)

貨號：MB-P08B

規(gui)格(ge)：0.2ml  平蓋

品牌：鋼(gang)士特GUNSTER(中國(guo)臺(tai)灣(wan))

名稱：PCR八聯排管(管蓋分離)

貨號：MB-P08D

規格：0.2ml  凸蓋

品牌：鋼(gang)士特GUNSTER(中國臺灣)

名稱：PCR 96孔(kong)板

貨號：MB-P96

規(gui)格：0.2ml  無裙(qun)邊  透明

半(ban)裙邊板：可(ke)適配標簽或應用條(tiao)碼，適合自(zi)動化應用，且有著(zhu)較好(hao)的(de)移液(ye)穩定性。

全裙邊板：非常(chang)適(shi)用于自動化實驗應用，也可(ke)適(shi)配標簽及應用條碼(ma)。機械強(qiang)度較好，可(ke)適(shi)用于凸(tu)出模塊的PCR儀，且(qie)移液(ye)過程中(zhong)穩定性高。

PCR技術的臨床應用

單克(ke)隆抗體技術曾(ceng)使免(mian)疫學(xue)(xue)理論與實踐有了新的(de)突(tu)破(po)，近幾年來PCR技術使分子生(sheng)物學(xue)(xue)及相關學(xue)(xue)科(ke)發生(sheng)了一次方法(fa)學(xue)(xue)的(de)革(ge)命。在(zai)不到10年的(de)時間內，在(zai)以下幾個領域中PCR技術已(yi)具(ju)有實用價值，且其應用范圍正在(zai)不斷擴大中。

1、遺傳病的產前診斷

用胎兒(er)羊(yang)膜細(xi)胞，羊(yang)水或甚至(zhi)母(mu)血(xue)可以檢(jian)查胎兒(er)的(de)性別，這在(zai)與性染(ran)色體(ti)關聯遺傳病(bing)(bing)診斷中是(shi)必要的(de)。對(dui)于(yu)(yu)高(gao)發的(de)遺傳病(bing)(bing)，如(ru)地中海貧(pin)血(xue)、鐮刀狀細(xi)胞貧(pin)血(xue)、凝血(xue)因子(zi)缺乏、DMD等已在(zai)臨(lin)床應用多(duo)年，為優生優育作了貢獻，對(dui)于(yu)(yu)有遺傳傾向(xiang)的(de)疾病(bing)(bing)尤其(qi)是(shi)老年性疾病(bing)(bing)，如(ru)糖(tang)尿病(bing)(bing)、高(gao)血(xue)脂癥、甚至(zhi)腫瘤中的(de)一部分，均(jun)是(shi)當前研究的(de)重點(dian)，近(jin)期內可望有突破。

2、致病病原體的檢測

這些外源入侵的(de)(de)(de)基(ji)因，一旦闡明其部分(fen)核酸序列(lie)，就可(ke)以設(she)計(ji)引物(wu)或(huo)探針，用(yong)PCR、PT-PCR或(huo)雜交方法來檢測(ce)(ce)，其范圍包括細(xi)菌(jun)、病毒、原蟲及寄(ji)生蟲、霉(mei)菌(jun)、立(li)克次體、衣原體和(he)(he)支原體等(deng)一切微生物(wu)，PCR診斷的(de)(de)(de)特點是可(ke)以選擇其基(ji)因中的(de)(de)(de)保(bao)守(shou)區作(zuo)通用(yong)檢測(ce)(ce)，也可(ke)以選定差異較大(da)的(de)(de)(de)基(ji)因部位(wei)作(zuo)分(fen)型(xing)檢測(ce)(ce)。既可(ke)以做一病原體的(de)(de)(de)專用(yong)檢測(ce)(ce)，也可(ke)以將有關病毒、細(xi)菌(jun)中不同的(de)(de)(de)品種作(zuo)一次多元檢測(ce)(ce)。而且檢測(ce)(ce)的(de)(de)(de)靈敏度和(he)(he)特異性都(dou)遠高于(yu)(yu)當(dang)前(qian)的(de)(de)(de)免(mian)疫學(xue)方法，所需時(shi)間也已達到(dao)臨床要(yao)求，這對于(yu)(yu)難于(yu)(yu)培養的(de)(de)(de)病毒（乙肝(gan)），細(xi)菌(jun)（如結核、厭氧菌(jun)）和(he)(he)原蟲（如梅(mei)毒螺旋體）等(deng)來說尤為適用(yong)。

3、癌基因的檢測和診斷

雖(sui)然(ran)對癌(ai)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)研究(jiu)大(da)部分(fen)(fen)還屬于(yu)基(ji)(ji)礎(chu)階段，但癌(ai)變是由基(ji)(ji)因(yin)變異所導(dao)致的(de)(de)(de)這一基(ji)(ji)本事實(shi)已無庸置疑，所以癌(ai)基(ji)(ji)因(yin)、抗(kang)(kang)癌(ai)基(ji)(ji)因(yin)入抗(kang)(kang)轉(zhuan)移(yi)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)研究(jiu)，離開分(fen)(fen)子(zi)水(shui)平的(de)(de)(de)診斷手段是無法(fa)進行的(de)(de)(de)，臨(lin)床上(shang)已可應用的(de)(de)(de)例子(zi)有(you)白血(xue)病殘留細(xi)胞的(de)(de)(de)定(ding)量（包括慢粒(li)和(he)急粒(li)），肺癌(ai)中P53及Rb等抗(kang)(kang)癌(ai)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)失活，神經質瘤N-myc基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)激活和(he)表達。通過(guo)原位雜交觀察(cha)特定(ding)癌(ai)基(ji)(ji)因(yin)及抗(kang)(kang)轉(zhuan)移(yi)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)植入和(he)反義寡核(he)苷(gan)酸對強表達癌(ai)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)阻斷均已成(cheng)為近代基(ji)(ji)因(yin)治(zhi)療的(de)(de)(de)著眼點。

4、DNA指紋、個體識別、親子關系鑒別及法醫物證

這(zhe)(zhe)一(yi)部分所矚(zhu)目的(de)課題已經在某些國家取得法律認可。肌紅蛋白小衛星基(ji)因，β-珠蛋白基(ji)因、ApoB基(ji)因等的(de)多肽性和重復次數的(de)差異都被(bei)應用(yong)于(yu)鑒定，其(qi)靈敏度(du)已達(da)到(dao)一(yi)根頭發(fa)、一(yi)個細胞取得個體特征圖譜(pu)，這(zhe)(zhe)一(yi)領域也已發(fa)展到(dao)骨髓(sui)或臟(zang)器移(yi)植配(pei)型及動物種系的(de)研究中(zhong)。

5、動、植物檢疫

靈敏、特(te)異、快(kuai)速診斷(duan)檢(jian)測方法是(shi)我(wo)國(guo)進(jin)出口口岸的門(men)衛，檢(jian)查出入國(guo)境的人員、動、植物（種畜、種籽）等(deng)是(shi)否攜帶烈(lie)性傳染病(bing)（艾滋、動物病(bing)毒(du)、植物病(bing)毒(du)等(deng)）病(bing)原體，食(shi)品、飼料等(deng)是(shi)否帶沙(sha)門(men)氏菌等(deng)均(jun)需要(yao)基因診斷(duan)手段將這些病(bing)菌拒之(zhi)于國(guo)境之(zhi)外，是(shi)提(ti)高我(wo)國(guo)綜合國(guo)力的必要(yao)保證。

6、高科技生物醫學領域中的應用

在轉基(ji)因動植物中檢查植入基(ji)因的(de)存(cun)在。PCR技(ji)術尚可應用于基(ji)因拼接、測序等領域。